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ChinaAbstract:ObjectiveTo establish a method for determination of the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae,and to determine the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places by this new method.MethodsThe DiamonsilC18(5 μm,250 mm×4.6 mm) column was used. The mobile phase was CH3CNH2O(65:35) and the detection wavelength was set at 235 nm.The flow rate was 1.00 ml·min-1 and the column temperature was 40℃. ResultsThe Nootkatone content showed a good linear relationship within the range of 0.115 2~0.268 8μg(r=0.999 9).The average recovery was 97.34% and RSD was 1.48%(n=6). the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places was within the range of 1.50~2.10 mg·g-1.ConclusionThe method is simple and the result was reliable. It can be used for the quality control of this herbal medicine.

  Key words: Fructus Alpinia oxyphyllae; Nootkatone

中药益智,为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实,主产于我国的海南和广东,为四大南药之一。其功效为温脾止泻,摄唾涎,暖肾,固精缩尿,主治脾寒泄泻,腹中冷痛,口多涎唾,肾虚遗尿,小便频数,遗精白浊[1]。我们的前期研究发现,益智石油醚提取部位为其缩尿作用的有效部位,并且通过气相色谱质谱联用分析,发现此部位中的主要化学成分为圆柚酮(Nootkatone)[2]。国外已有研究报道,从益智药材中分离得到的圆柚酮,在抗实验性胃溃疡、抑制脂多糖活化巨噬细胞中NO的产生和抑制由抗原引发的RBL2H3细胞的脱落等方面具有显著的活性,为益智药材的有效成分之一[3]。而对于益智药材中圆柚酮的含量情况还未见相关报道。为了更好地控制药材质量,我们采用高效液相色谱法建立了益智药材中圆柚酮的含量测定方法,并测定不同产地药材中圆柚酮的含量。

  1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪,HPChemStation 6.04软件包(美国Agilent公司);赛多利斯Bp211DAG电子天平(德国Sartorius公司);超声波清洗器CX100(北京医疗设备二厂)。圆柚酮对照品由美国Sigma公司提供(批号:10112423,纯度>98%)。乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。不同产地的药材由成都中医药大学谢秀琼教授从各产地收集,并经成都中医药大学卢先明教授鉴定为姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果实。

  2 方法与结果

  2.1 色谱条件

  色谱柱为DiamonsilC18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相为乙腈水(65∶35);检测波长为235 nm;流速为1.00 ml·min-1;柱温为40℃。灵敏度为0.005AUFS。在选定条件下,圆柚酮与样品中其他色谱峰达基线分离,其理论塔板数(N)大于4 000。对照品溶液和供试品溶液色谱图见图1~2。

  2.2 对照品溶液的制备

  取圆柚酮对照品适量,精密称定,置25 ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,制成含圆柚酮0.480 0 mg·ml-1的对照品溶液。

  2.3 供试品溶液的制备

  取益智药材,除去杂质及外壳,粉碎,过40目筛。取粉末约0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加甲醇25 ml,称定重量,超声提取(360 W,35 kHz)30 min,放冷至室温,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,用0.45 μm微孔滤膜滤过,即得。

  2.4 线性关系考察

  精密吸取圆柚酮对照品溶液(0.480 0 mg·ml-1) 0.6,0.8,1.0,1.2,1.4 ml,分别置25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,进样10 μl测定峰面积。以对照品进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线,则回归方程为:A=3 237.2C 4.33,r=0.999 9。表明圆柚酮在0.115 2~0.268 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

  2.5 精密度实验

  精密吸取上述对照品溶液10 μl,重复进样5次,峰面积RSD=0.20%,表明仪器的精密度良好。

  2.6 重复性实验

  取同一批样品(海南省琼中县出产)5份,分别按供试品溶液的制备方法制备,进样10 μl,测定峰面积,计算含量。其RSD=1.23%,表明该方法重复性良好。

  2.7 稳定性实验

  取同一供试品溶液,分别于0,2,4,6,8 h进样10 μl,测定峰面积,计算含量。其RSD=0.32%,表明供试品溶液在8 h内稳定。

  2.8 加样回收率实验

  取6份已知含量的样品(海南省琼中县出产,含量为2.10 mg·g-1)约0.1 g,精密称定,分别加入圆柚酮对照品溶液(0.480 0mg·ml-1) 0.5 ml。按供试品溶液的制备方法制备,进样10 μl,测定峰面积,计算回收率。结果见表1,平均回收率为97.34%,RSD=1.48%。表1 加样回收率实验结果 (略)

  2.9 样品的含量测定取不同产地的益智药材,用本实验方法测定。结果见表2。表2 不同产地益智药材中圆柚酮含量测量结果(略)

  3 讨论

圆柚酮(Nootkatone)又称诺卡酮,是属于雅槛蓝烷(eremophilane)系的双环倍半萜酮。其甲醇溶液在200~400 nm波长下扫描,结果在235 nm波长处存在最大吸收峰,故选择235 nm作为检测波长。

  益智从《中国药典》1963版Ⅰ部即开始收载,现行版《中国药典》的含量测定项下只要求本品种子含挥发油不得少于1.0%(ml·g-1),对于其中指标性成分的含量限度暂无规定。本文建立了益智药材中圆柚酮的高效液相色谱含量测定方法,并对不同产地药材样品进行含量测定,结果重复性好、精密度高、操作简便,效果满意,可作为益智药材的质量控制方法,也可为益智药材的栽培及收购等提供参考。

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